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1、前言

咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物，是一種中樞神經(jīng)興奮劑，能夠暫時(shí)的驅(qū)走睡意并恢復(fù)精力，臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復(fù)蘇。有咖啡因成分的咖啡、茶、軟飲料及能量飲料十分暢銷，因此，咖啡因也是普遍被使用的精神藥品。適度地使用咖啡因具有舒張血管、促進(jìn)血液循環(huán)、預(yù)防高血壓、心肌梗塞、利尿、解毒、抗氧化、抗衰老、減肥等藥理和生理作用，但是，大劑量或長期使用也會對人體造成損害，能夠?qū)е?ldquo;咖啡因中毒”，如神經(jīng)過敏，易怒，焦慮，震顫，肌肉抽搐（反射亢進(jìn)），失眠和心悸。中國把咖啡因列為“精神藥品”管制，屬于一種毒品。目前有關(guān)咖啡因檢測分析的研究報(bào)道不多，為此本文通過使用SPE 1000全自動固相萃取系統(tǒng)對人體血液中咖啡因進(jìn)行回收率測定分析，探索血液咖啡因樣本檢測的方法。

2、實(shí)驗(yàn)過程2.1儀器與試劑

SPE 1000全自動固相萃取系統(tǒng)，萊伯泰科

MV5多通道平行濃縮系統(tǒng)，萊伯泰科

LC600 二元高壓梯度高效液相色譜，萊伯泰科

EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號：PZ12602）

血液替代品：牛血清，市售

2.2工作液配制

咖啡因標(biāo)準(zhǔn)儲備液：100μg/mL

咖啡因標(biāo)準(zhǔn)工作液：取1mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液放入10mL容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液

2.3實(shí)驗(yàn)部分

2.3.1樣品制備

取血液樣本1mL加入磷酸鹽緩沖液1mL平衡，加入50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液，混合均勻，加標(biāo)濃度為500ng/mL，待固相萃取。

2.3.2凈化與濃縮

EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號：PZ12702）用5mL甲醇乙酸乙酯（1：1）、5mL水和5mL磷酸鹽緩沖液進(jìn)行活化，取全部樣液上樣，上樣結(jié)束后用2mL磷酸鹽緩沖液和2mL水淋洗萃取柱，在真空狀態(tài)下干燥0.5min，最后用5mL 磷酸鹽緩沖液近干后，用流動相定容至1mL 。渦旋混勻，0.22μm濾膜過濾，待檢測。

2.3.3 高效液相色譜檢測條件

色譜柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm

波長：272nm

流速：1mL/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣量：20μL

流動相：甲醇-水= 24：76

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2加標(biāo)樣品色譜圖

圖3空白樣品色譜圖表1 加標(biāo)回收率結(jié)果

4、結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)展示了一種使用EZsep^TMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京萊伯帕茲檢測科技有限公司貨號：PZ12702）對血液中咖啡因進(jìn)行萃取凈化，其加標(biāo)回收率95.8%~99.2%，重復(fù)性RSD為1.6%。說明EZsep^TMHLB固相萃取柱適用于血液中咖啡因的檢測，并且在回收率和平行性上表現(xiàn)優(yōu)異。

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耗材專區(qū)血液中咖啡因的測定

2.2工作液配制

2.3.1樣品制備

2.3.2凈化與濃縮

2.3.3 高效液相色譜檢測條件